Нарсны нематод нь нарсан ойн экосистемд эдийн засгийн ноцтой хохирол учруулдаг хорио цээрийн дэглэмийн нүүдлийн эндопаразит юм. Энэхүү судалгаанд нарсны нематодын эсрэг галогенжуулсан индолын нематицидийн үйл ажиллагаа, тэдгээрийн үйл ажиллагааны механизмыг авч үзсэн. Нарсны нематодын эсрэг 5-иодоиндол ба авермектины (эерэг хяналт) нематик устгах үйл ажиллагаа нь ижил төстэй бөгөөд бага концентрацид (10 мкг/мл) өндөр байв. 5-иодоиндол нь үржил шим, нөхөн үржихүйн үйл ажиллагаа, үр хөврөл, авгалдайн үхэл, хөдөлгөөний хөдөлгөөнийг бууруулдаг. Лигандын сээр нуруугүйтний өвөрмөц глутаматтай хлоридын сувгийн рецепторуудтай молекулын харилцан үйлчлэл нь авермектин шиг 5-иодоиндол нь рецепторын идэвхтэй хэсэгт нягт холбогддог гэсэн ойлголтыг дэмждэг. 5-Иодоиндол нь нематодуудад янз бүрийн фенотипийн хэв гажилтыг өдөөдөг бөгөөд үүнд хэвийн бус эрхтний уналт/агшилт, вакуолизаци нэмэгдсэн. Эдгээр үр дүн нь вакуолууд нь нематодын метилжилтээс үүдэлтэй үхэлд чухал үүрэг гүйцэтгэдэг болохыг харуулж байна. Хамгийн чухал нь 5-иодоиндол нь ургамлын аль алинд нь (байцаа, улаан лууван) хоргүй байсан. Иймд хүрээлэн буй орчны нөхцөлд иодоиндолыг хэрэглэх нь нарсны хорхойн гэмтлийг хянах боломжтой болохыг энэхүү судалгаа харуулж байна.
Нарсны нематод (Bursaphelenchus xylophilus) нь нарсан ойн экосистемд экологид ноцтой хохирол учруулдаг нүүдлийн дотоод паразит нематодуудад хамаардаг1. Нарсны нематодоор үүсгэгддэг нарсны хорхойн өвчин (ХБХ) нь Ази, Европ зэрэг хэд хэдэн тивд ноцтой асуудал болоод байгаа бөгөөд Хойд Америкт нематод нутагшсан нарсны төрөл зүйлийг устгадаг1,2. Нарс модны хомсдол нь эдийн засгийн томоохон асуудал бөгөөд дэлхий даяар тархах төлөв нь түгшүүр төрүүлж байна3. Дараах нарсны төрөл зүйл нь нематодын халдлагад ихэвчлэн өртдөг: Pinus densiflora, Pinus sylvestris, Pinus thunbergii, Pinus koraiensis, Pinus thunbergii, Pinus thunbergii, Pinus radiata4. Нарсны нематод нь нарс модыг халдвар авснаас хойш хэдэн долоо хоног эсвэл хэдэн сарын дотор устгадаг ноцтой өвчин юм. Түүнчлэн нарсны нематодын дэгдэлт нь янз бүрийн экосистемд түгээмэл байдаг тул халдварын байнгын гинжин хэлхээ бий болсон1.
Bursaphelenchus xylophilus нь Aphelenchoidea овгийн 102.5 бүлэгт хамаарах хорио цээрийн дэглэм бүхий ургамал-шимэгч хорхойтнууд юм. Нематод нь мөөгөнцөрөөр хооллож, нарс модны модны эдэд үржиж, L1, L2, L3, L4 болон насанд хүрсэн биет гэсэн дөрвөн өөр авгалдай үе шат болгон хөгжүүлдэг1,6. Хүнсний хомсдолын нөхцөлд нарсны нематод нь авгалдайн тусгай үе шатанд шилжиж, түүний вектор болох нарсны холтос цох (Monochamus alternatus) шимэгчлэн амьдардаг бөгөөд эрүүл нарс мод руу шилждэг. Эрүүл гэрийн тэжээвэр амьтанд нематодууд ургамлын эд эсээр хурдан нүүж, паренхимийн эсүүдээр хооллодог бөгөөд энэ нь халдвар авснаас хойш нэг жилийн дотор хэт мэдрэгшил, нарс хатах, үхэлд хүргэдэг1,7,8.
Нарсны нематодтой биологийн тэмцэл нь 20-р зуунаас эхлэн хорио цээрийн арга хэмжээ авч эхэлсэн тул удаан хугацаанд бэрхшээлтэй байсаар ирсэн. Нарсны нематодтой тэмцэх одоогийн стратеги нь голчлон химийн боловсруулалт, тэр дундаа модыг утах, модны их биенд нематицид суулгах зэрэгт ордог. Хамгийн түгээмэл хэрэглэгддэг нематицидууд нь авермектины гэр бүлд хамаарах авермектин ба авермектин бензоат юм. Эдгээр үнэтэй химийн бодисууд нь олон төрлийн нематодын эсрэг өндөр үр дүнтэй бөгөөд байгаль орчинд аюулгүй гэж тооцогддог9. Гэсэн хэдий ч эдгээр нематицидийг олон удаа хэрэглэх нь сонгон шалгаруулалтын дарамтыг бий болгох бөгөөд энэ нь тэсвэртэй нарсны нематод үүсэхэд хүргэдэг бөгөөд үүнийг Leptinotarsa decemlineata, Plutella xylostella, Trichostrongylus colubriformis, Ostertagia зэрэгт аажмаар тэсвэртэй нематодууд харуулсан. авермектин 10,11,12. Тиймээс PVD-тэй тэмцэх өөр, хэмнэлттэй, байгаль орчинд ээлтэй арга хэмжээг олохын тулд эсэргүүцлийн хэв маягийг тогтмол судалж, нематицидийг тасралтгүй шалгаж байх шаардлагатай. Сүүлийн хэдэн арван жилд хэд хэдэн зохиогчид ургамлын ханд, эфирийн тос, дэгдэмхий бодисыг нематодтой тэмцэх бодис болгон ашиглахыг санал болгосон13,14,15,16.
Бид саяхан Caenorhabditis elegans 17-д эс хоорондын болон хаант улс хоорондын дохионы молекул болох индолын нематицидийн идэвхийг харуулсан. Индол нь бичил биетний экологид өргөн тархсан эсийн доторх дохио бөгөөд бичил биетний физиологи, спор үүсэх, плазмидын тогтвортой байдал, эмэнд тэсвэртэй байдал, био хальс үүсэх, хоруу чанар зэрэгт нөлөөлдөг олон тооны функцийг хянадаг 18, 19 . Бусад эмгэг төрүүлэгч нематодуудын эсрэг индол ба түүний деривативуудын үйл ажиллагааг судлаагүй байна. Энэхүү судалгаанд бид 34 төрлийн индолын нарсны нематодын эсрэг нематицидийн идэвхийг судалж, хамгийн хүчтэй 5-иодоидолын үйл ажиллагааны механизмыг микроскоп, цаг хугацааны гэрэл зураг, молекул залгах туршилтуудыг ашиглан тодруулж, үрийн соёололтыг ашиглан ургамалд үзүүлэх хорт нөлөөг үнэлэв.
Индолын өндөр концентраци (>1.0 мМ) нь нематод17-д нематицид нөлөө үзүүлдэг болохыг өмнө нь мэдээлж байсан. B. xylophilus (холимог амьдралын үе шатууд)-ыг индол буюу 33 өөр индолийн деривативаар 1 мМ-ээр эмчилсний дараа хяналтын болон эмчилсэн бүлэгт амьд ба үхсэн нематодыг тоолж B. xylophilus-ийн үхлийг хэмжсэн. Таван индол нь чухал ач холбогдолтой нематицидийн идэвхийг харуулсан; 24 цагийн дараа эмчилгээ хийлгээгүй хяналтын бүлгийн амьд үлдэх хугацаа 95 ± 7% байв. Туршилтанд хамрагдсан 34 индолоос 1 мм-ийн 5-иодоиндол, 4-фториндол 100%, харин 5,6-дифториндиго, метилиндол-7-карбоксилат, 7-иодоиндол 50 орчим хувь нь нас баралтад хүргэсэн байна (Хүснэгт 1).
Нарсны нематодын вакуол үүсэх, бодисын солилцоонд 5-иодоидолын нөлөө. (A) Насанд хүрсэн эр нематод, (B) L1 үе шатны нематодын өндөг, (C) B. xylophilus-ийн бодисын солилцоо, (i) 0 цагт вакуолууд ажиглагдаагүй, эмчилгээний үр дүнд (ii) вакуол, (iii) вакуол, (iii) вакуол, олон тооны вакуол хуримтлагдах, (вакуол) хуримтлагдсан (A) Аврмектин ба 5-иодоидолын нөлөө вакуолуудын нэгдэл ба (vi) аварга том вакуоль үүсэх. Улаан сум нь вакуолын хаваныг, цэнхэр сум нь вакуолуудын нэгдлийг, хар сум нь аварга том вакуолуудыг илтгэнэ. Хуваарийн мөр = 50 μм.
Нэмж дурдахад энэхүү судалгаа нь нарсны нематодын метанаас үүдэлтэй үхлийн дараалсан үйл явцыг мөн тодорхойлсон (Зураг 4C). Метаноген үхэл нь цитоплазмын тод вакуолуудын хуримтлалтай холбоотой эсийн үхлийн апоптозын бус төрөл юм27. Нарсны нематодуудад ажиглагдсан морфологийн согогууд нь метанаар өдөөгдсөн үхлийн механизмтай нягт холбоотой байдаг. Өөр өөр цаг үеийн бичил харуурын шинжилгээгээр 5-иодоиндол (0.1 ммМ)-д 20 цагийн турш өртсөний дараа аварга том вакуолууд үүссэн болохыг харуулсан. Эмчилгээний дараа 8 цагийн дараа микроскопийн вакуоль ажиглагдаж, 12 цагийн дараа тэдний тоо нэмэгджээ. 14 цагийн дараа хэд хэдэн том вакуоль ажиглагдсан. Эмчилгээний дараа 12-16 цагийн дараа хэд хэдэн ууссан вакуолууд тодорхой харагдаж байсан нь вакуолын нэгдэл нь метаногенийн үхлийн механизмын үндэс болохыг харуулж байна. 20 цагийн дараа өт дотор хэд хэдэн аварга вакуоль олдсон байна. Эдгээр ажиглалтууд нь C. elegans дахь метуозын анхны тайланг харуулж байна.
5-иодоиндолоор эмчилсэн хорхойнуудад вакуоль бөөгнөрөх, хагарах нь бас ажиглагдсан (Зураг 5) нь өт гулзайлгах, хүрээлэн буй орчинд вакуоль ялгарах зэргээр нотлогддог. Өндөгний бүрхүүлийн мембранд вакуолын тасалдал ажиглагдсан бөгөөд энэ нь ангаахайн үед L2-ээр бүрэн бүтэн хадгалагддаг (Нэмэлт зураг S2). Эдгээр ажиглалтууд нь шингэний хуримтлал, osmoregulatory дутагдал, түүнчлэн нөхөн сэргээгдэх эсийн гэмтэл (RCI) нь вакуол үүсэх, шингээх процесст оролцдог болохыг баталж байна (Зураг 5).
Ажиглагдсан вакуол үүсэхэд иодын үүргийг таамаглаж, бид натрийн иодид (NaI) ба калийн иодид (KI) -ийн нематицидийн идэвхийг судалсан. Гэсэн хэдий ч концентрацид (0.1, 0.5 эсвэл 1 мМ) тэдгээр нь нематодын амьд үлдэх эсвэл вакуол үүсэхэд нөлөөлөөгүй (Нэмэлт зураг. S5), гэхдээ 1 мм KI нь бага зэрэг нематицид нөлөөтэй байв. Нөгөөтэйгүүр, 7-иодоиндол (1 эсвэл 2 мМ) нь 5-иодоиндол шиг олон вакуоль ба бүтцийн хэв гажилтыг өдөөдөг (Нэмэлт зураг S6). Хоёр иодоидол нь нарсны нематодуудад ижил төстэй фенотип шинж чанартай байсан бол NaI ба KI нь тийм биш байв. Сонирхолтой нь, индол нь B. xylophilus-д шалгагдсан концентрацид вакуол үүсэхийг өдөөгүй (өгөгдлийг харуулаагүй). Тиймээс үр дүн нь индол-иодын цогцолбор нь B. xylophilus-ийн вакуолизаци, бодисын солилцоог хариуцдаг болохыг баталсан.
Нематикид идэвхжсэн эсэхийг шалгасан индолуудаас 5-иодоиндол хамгийн их гулсалтын индексийг -5.89 ккал/моль, удаахь нь 7-иодоиндол (-4.48 ккал/моль), 4-фториндол (-4.33), индол (-4.03) байна (Зураг 6). 5-иодоиндол болон лейцин 218-тай хүчтэй устөрөгчийн холбоо нь түүний холболтыг тогтворжуулдаг бол бусад бүх индолийн деривативууд нь хажуугийн гинжин хэлхээний устөрөгчийн холбоогоор серин 260-тай холбогддог. Бусад загварчилсан иодоиндолуудаас 2-иодоиндол нь -5.248 ккал/моль-ийн холбох утгатай бөгөөд энэ нь лейцин 218-тай үндсэн устөрөгчийн холбооноос шалтгаална. Бусад мэдэгдэж буй холболтууд нь 3-иодоиндол (-4.3 ккал/моль), 4-иодоиндол (-4.0 ккал/моль) (-4.0 ккал/моль) зэрэг орно. ккал/моль) (нэмэлт зураг S8). Ихэнх галогенжүүлсэн индолууд болон индолууд нь 5-иодоиндол ба 2-иодоиндолоос бусад нь серин 260-тай холбоо үүсгэдэг. Лейкин 218-тай устөрөгчийн холбоо нь ивермектины хувьд рецептор-лигандын үр дүнтэй холболтыг харуулж байна (Нэмэлт Fig-iodoindols). 2-иодоиндол нь ивермектин шиг лейцин 218-аар дамжуулан GluCL рецепторын идэвхтэй хэсэгт нягт холбогддог (Зураг 6 ба нэмэлт зураг S8). Энэ холболт нь GluCL цогцолборын нээлттэй нүх сүвний бүтцийг хадгалахад шаардлагатай бөгөөд GluCL рецепторын идэвхтэй хэсэг болох 5-иодоиндол, 2-иодоиндол, авермектин, ивермектинтэй нягт холбогдож, ионы сувгийг нээлттэй байлгаж, шингэнийг шингээх боломжийг олгоно.
Индол ба галогенжүүлсэн индолыг GluCL-д молекул залгах. (A) индол, (B) 4-фториндол, (C) 7-иодоиндол, (D) 5-иодоиндол лигандын GluCL-ийн идэвхтэй хэсэгт холбогдох чиглэл. Уургийг туузаар дүрсэлсэн бөгөөд нурууны устөрөгчийн холбоог шар өнгийн тасархай шугамаар дүрсэлсэн байна. (A'), (B'), (C'), (D') нь харгалзах лигандуудын эргэн тойрон дахь амин хүчлийн үлдэгдэлтэй харилцан үйлчлэлийг харуулсан ба хажуугийн гинжин устөрөгчийн холбоог ягаан тасархай сумаар тэмдэглэв.
Байцаа, улаан луувангийн үрийн соёололтод 5-иодоиндолын хортой нөлөөг үнэлэх туршилт хийсэн. 5-иодоиндол (0.05 эсвэл 0.1 мм) эсвэл авермектин (10 мкг/мл) нь анхны соёололт болон ургамлын ургалтад бага эсвэл огт нөлөө үзүүлсэнгүй (Зураг 7). Түүнчлэн 5-иодоиндол эсвэл авермектинээр эмчилсэн үрийн соёололт, боловсруулаагүй хяналтын үрийн хооронд мэдэгдэхүйц ялгаа илрээгүй. 5-иодоиндолын 1 мМ (түүний идэвхтэй агууламжаас 10 дахин их) нь хажуугийн үндэс үүсэхийг бага зэрэг удаашруулж байсан ч үндсэн үндэс суналт болон үүссэн хажуугийн үндэсийн тоонд үзүүлэх нөлөө нь ач холбогдолгүй байв. Эдгээр үр дүн нь 5-иодоиндол нь ургамлын эсэд хоргүй бөгөөд судлагдсан концентрацид ургамлын хөгжлийн үйл явцад саад болохгүй болохыг харуулж байна.
Үрийн соёололтод 5-иодоидолын үзүүлэх нөлөө. Мурашигэ, Скоог агарын орчинд аввермектин эсвэл 5-иодоиндол агуулсан B. oleracea, R. raphanistrum үрийн соёололт, соёололт, хажуугийн үндэс. Соёололтыг 22 хэмд 3 хоногийн инкубацийн дараа тэмдэглэв.
Энэхүү судалгаагаар нематодыг индолоор устгасан хэд хэдэн тохиолдлыг мэдээлдэг. Хамгийн чухал нь, энэ нь нарс зүүнд иодоидолын метилизацийг өдөөдөг (жижиг вакуолууд аажмаар аварга том вакуольд нийлж, улмаар мембран хагарах, үхэлд хүргэдэг үйл явц) анхны тайлан бөгөөд иодоиндол нь арилжааны нематикийн шинж чанартай төстэй нематицид шинж чанартай байдаг.
Индолууд нь прокариот ба эукариотуудад био хальсыг дарангуйлах/үүсгэх, нянгийн оршин тогтнох, эмгэг төрүүлэх зэрэг олон дохионы үүргийг гүйцэтгэдэг гэж өмнө нь мэдээлсэн байдаг19,32,33,34. Сүүлийн үед галогенжүүлсэн индол, индол алкалоид, хагас синтетик индолийн деривативуудын эмчилгээний үр нөлөөг судлах өргөн хүрээний сонирхолыг татаж байна35,36,37. Жишээлбэл, галогенжуулсан индолууд нь гэдэсний савханцар болон алтан стафилококкийн эсүүдийг устгадаг37. Үүнээс гадна галогенжуулсан индолын бусад төрөл зүйл, төрөл, хаант улсуудын эсрэг үр нөлөөг судлах нь шинжлэх ухааны сонирхолтой бөгөөд энэхүү судалгаа нь энэ зорилгод хүрэх алхам юм.
Энд бид сэргээгдэх эсийн гэмтэл (RCI) ба метилизаци (Зураг 4С ба 5) дээр суурилсан C. elegans-ийн 5-иодоиндолоор өдөөгдсөн үхлийн механизмыг санал болгож байна. Хаван болон вакуолийн доройтол зэрэг хавантай өөрчлөлтүүд нь цитоплазм дахь аварга том вакуолууд хэлбэрээр илэрдэг RCI ба метилизацийн үзүүлэлтүүд юм48,49. RCI нь ATP-ийн нийлэгжилтийг бууруулж, ATPase насосыг доголдуулах, эсхүл эсийн мембраныг тасалдуулж, Na+, Ca2+, усны хурдан урсгалыг бий болгосноор эрчим хүчний үйлдвэрлэлд саад учруулдаг50,51,52. Амьтны эсийн доторх вакуолууд нь Ca2+, усны урсгалын улмаас цитоплазмд шингэн хуримтлагдсаны үр дүнд үүсдэг. Сонирхолтой нь хэрэв гэмтэл түр зуурын шинжтэй, эсүүд тодорхой хугацаанд АТФ үйлдвэрлэж эхэлбэл эс гэмтэх энэхүү механизм нь буцаагдах боломжтой боловч гэмтэл нь үргэлжлэх юм уу даамжирвал эсүүд үхдэг.54 Бидний ажиглалтаас харахад 5-иодоиндолоор эмчилсэн нематодууд стресст өртсөний дараа хэвийн биосинтезийг сэргээх боломжгүй байдаг.
B. xylophilus-д 5-иодоиндолоор өдөөгдсөн метилжилтийн фенотип нь иод агуулагдаж, түүний молекулын тархалттай холбоотой байж болох юм, учир нь 7-иодоиндол нь 5-иодоиндолтой харьцуулахад B. xylophilus-д дарангуйлах нөлөө багатай байсан (Хүснэгт 1 ба нэмэлт зураг S6). Эдгээр үр дүн нь Мальта нарын хийсэн судалгаатай хэсэгчлэн нийцэж байна. (2014), индол дахь пиридил азотын хэсгийг пара-байрлалаас мета-байрлал руу шилжүүлснээр U251 эсийн вакуолизаци, өсөлтийг дарангуйлах, цитотоксик шинж чанарыг арилгасан гэж мэдээлсэн нь уургийн тодорхой идэвхтэй газартай молекулын харилцан үйлчлэл чухал болохыг харуулж байна27,44,45. Энэ судалгаанд ажиглагдсан индол эсвэл галогенжүүлсэн индол ба GluCL рецепторуудын харилцан үйлчлэл нь мөн энэ ойлголтыг дэмжиж байна, учир нь 5 ба 2-иодоиндол нь бусад судлагдсан индолуудаас илүү GluCL рецептортой холбогддог (Зураг 6 ба нэмэлт зураг S8). Индолын хоёр, тав дахь байрлал дахь иод нь GluCL рецепторын лейцин 218-тай үндсэн устөрөгчийн холбоогоор холбогддог бол бусад галогенжүүлсэн индолууд болон индолууд нь серин 260-тай сул хажуугийн устөрөгчийн холбоо үүсгэдэг (Зураг 6). Тиймээс бид галогенийг нутагшуулах нь вакуолын доройтлыг өдөөхөд чухал үүрэг гүйцэтгэдэг бол 5-иодоиндолыг нягт холбосноор ионы сувгийг нээлттэй байлгаж, улмаар шингэний урсгал болон вакуоль хагарал үүсэх боломжийг олгодог гэж бид таамаглаж байна. Гэсэн хэдий ч 5-иодоидолын үйл ажиллагааны нарийвчилсан механизмыг тодорхойлох шаардлагатай хэвээр байна.
5-иодоидолыг практикт хэрэглэхээс өмнө түүний ургамалд үзүүлэх хортой нөлөөг шинжлэх хэрэгтэй. Бидний үрийн соёололтод хийсэн туршилтууд нь судалсан концентрацид 5-иодоиндол нь үрийн соёололт болон дараагийн хөгжлийн процесст сөрөг нөлөөгүй болохыг харуулсан (Зураг 7). Иймд энэхүү судалгаа нь нарсны нематодын нарс модны хор хөнөөлийг хянах зорилгоор экологийн орчинд 5-иодоиндолыг ашиглах үндэслэл болж байна.
Өмнөх тайлангууд нь индол дээр суурилсан эмчилгээ нь антибиотикт тэсвэртэй байдал, хорт хавдрын явцын асуудлыг шийдвэрлэх боломжит хандлагыг харуулж байна55. Нэмж дурдахад, индол нь бактерийн эсрэг, хорт хавдрын эсрэг, антиоксидант, үрэвслийн эсрэг, чихрийн шижингийн эсрэг, вирусын эсрэг, үржлийн эсрэг, сүрьеэгийн эсрэг үйлчилгээтэй бөгөөд эм боловсруулах ирээдүйтэй үндэс суурь болж чадна56,57. Энэхүү судалгаа нь анх удаа иодыг паразит болон антигельминтик бодис болгон ашиглах боломжийг санал болгож байна.
Авермектин нь гучин жилийн өмнө нээгдэж, 2015 онд Нобелийн шагнал хүртсэн бөгөөд антигельминтик эм болгон ашиглах нь одоог хүртэл идэвхтэй хэвээр байна. Гэсэн хэдий ч нематод болон шавьжны хортон шавьжийн авермектинийг эсэргүүцэх чадвар хурдацтай хөгжиж байгаа тул нарс модны PWN халдварыг хянах өөр, хямд, байгаль орчинд ээлтэй стратеги шаардлагатай байна. Энэхүү судалгаа нь мөн 5-иодоиндол нь нарсны нематодыг устгадаг механизмыг мөн 5-иодоиндол нь ургамлын эсэд бага хоруу чанартайг илтгэж байгаа нь түүнийг ирээдүйд худалдаанд ашиглах таатай боломжийг нээж өгч байна.
Бүх туршилтыг БНСУ-ын Кёнсан хотын Ённам их сургуулийн Ёс зүйн хорооноос зөвшөөрч, аргачлалыг Юннам их сургуулийн Ёс зүйн хорооны удирдамжийн дагуу гүйцэтгэсэн.
Өндөгний инкубацийн туршилтыг тогтоосон журмын дагуу хийсэн43. Ангаахайн хурдыг (HR) үнэлэхийн тулд 1 хоногийн настай насанд хүрсэн нематод (ойролцоогоор 100 эм, 100 эрэгтэй) мөөгөнцөр агуулсан Петрийн аяганд шилжүүлж, 24 цагийн турш ургахыг зөвшөөрөв. Дараа нь өндөгийг тусгаарлаж, ариутгасан нэрмэл усанд суспенз болгон 5-иодоиндол (0.05 ба 0.1 мм) эсвэл авермектин (10 мкг/мл) -аар эмчилнэ. Эдгээр суспензийг (500 мкл; ойролцоогоор 100 өндөг) 24 цооногийн эдийн өсгөвөрийн хавтангийн нүхэнд шилжүүлж, 22 ° C-т өсгөвөрлөсөн. L2 тооллогыг 24 цагийн инкубацийн дараа хийсэн боловч цагаан алтны нарийн утсаар өдөөх үед эсүүд хөдлөхгүй бол үхсэнд тооцогдоно. Энэхүү туршилтыг хоёр үе шаттайгаар, тус бүр нь зургаан давталттайгаар явуулсан. Хоёр туршилтын өгөгдлийг нэгтгэж танилцуулсан. Хүний нөөцийн хувийг дараах байдлаар тооцоолно.
Авгалдайн үхэлд урьд өмнө боловсруулсан процедурыг ашиглан үнэлэв. Нематодын өндөгийг цуглуулж, үр хөврөлийг ариутгасан нэрмэл усанд ангаахайгаар синхрончилж, L2 шатны авгалдай үүсгэсэн. Синхрон авгалдай (ойролцоогоор 500 нематод) 5-иодоиндол (0.05 мМ ба 0.1 мм) эсвэл авермектин (10 мкг/мл) -аар эмчилж, B. cinerea Петрийн ялтсууд дээр өсгөвөрлөсөн. 22 0С-т 48 цагийн инкубацийн дараа нематодуудыг ариутгасан нэрмэл усанд цуглуулж, L2, L3, L4 үе шатууд байгаа эсэхийг шалгасан. L3 ба L4 үе шат байгаа нь авгалдайн хувирал байгааг илтгэсэн бол L2 үе шат байгаа нь хувиргалтгүй байгааг илтгэнэ. Зургийг iRiS™ дижитал эсийн дүрслэлийн системийг ашиглан авсан. Энэхүү туршилтыг хоёр үе шаттайгаар, тус бүр нь зургаан давталттайгаар явуулсан. Хоёр туршилтын өгөгдлийг нэгтгэж танилцуулсан.
5-иодоиндол ба авермектины үрэнд үзүүлэх хоруу чанарыг Мурашигэ, Скоог агарын хавтан дээр соёолох туршилтыг ашиглан үнэлэв.62 B. oleracea болон R. raphanistrum үрийг эхлээд нэг өдрийн турш ариутгасан нэрмэл усанд дэвтээж, 1 мл 100% этилийн спиртээр угааж, 1 мл 100% этилийн спиртээр угаана. гипохлорит) 15 минут байлгаад 1 мл ариутгасан усаар таван удаа угаана. Дараа нь ариутгасан үрийг 0.86 г/л (0.2X) Мурашиге ба Скоог тэжээллэг орчин, 0.7%-ийн нян судлалын агар агуулсан 5-иодоиндол эсвэл авермектин агуулсан соёололт агарын хавтан дээр дарсан. Дараа нь ялтсуудыг 22 ° C-т өсгөвөрлөж, 3 хоногийн инкубацийн дараа зургийг авсан. Энэ туршилтыг хоёр үе шаттайгаар явуулсан бөгөөд тус бүр нь зургаан удаа давтагдсан.
Шуудангийн цаг: 2025 оны 2-р сарын 26-ны хооронд