Нарсны нематод нь нарсны ойн экосистемд эдийн засгийн ноцтой хохирол учруулдаг гэдгээрээ алдартай хорио цээрийн нүүдлийн эндопаразит юм. Одоогийн судалгаагаар галогенжүүлсэн индолын нарсны нематодын эсрэг нематоцид идэвхжил болон тэдгээрийн үйлчлэх механизмыг авч үзэж байна. 5-иодоиндол ба авермектины (эерэг хяналт) нарсны нематодын эсрэг нематоцид идэвхжил нь бага концентрацид (10 мкг/мл) ижил төстэй бөгөөд өндөр байсан. 5-иодоиндол нь үржил шим, нөхөн үржихүйн идэвхжил, үр хөврөлийн болон авгалдайн нас баралт, хөдөлгөөний зан үйлийг бууруулсан. Лигандын сээр нуруугүй амьтдад өвөрмөц глутаматаар хамгаалагдсан хлоридын сувгийн рецепторуудтай молекулын харилцан үйлчлэл нь авермектинтэй адил 5-иодоиндол нь рецепторын идэвхтэй хэсэгт нягт холбогддог гэсэн ойлголтыг дэмжиж байна. 5-Иодоиндол нь нематодуудад янз бүрийн фенотипийн деформацийг өдөөсөн бөгөөд үүнд эрхтэний хэвийн бус нуралт/агшилт, вакуолжилт нэмэгдэх зэрэг орно. Эдгээр үр дүнгээс харахад вакуолууд нь нематодын метилжилтээр дамжсан үхэлд чухал үүрэг гүйцэтгэдэг байж магадгүй юм. Чухал зүйл бол 5-иодоиндол нь ургамлын төрөл зүйлд (байцаа, улаан лууван) хоргүй байсан. Тиймээс энэхүү судалгаагаар байгаль орчны нөхцөлд иодоиндол түрхэх нь нарсны навчит өвчнийг хянах боломжтой болохыг харуулж байна.
Нарс модны нематод (Bursaphelenchus xylophilus) нь нарс модны нематод (PWN) бөгөөд нарс ойн экосистемд ноцтой экологийн хохирол учруулдаг гэдгээрээ алдартай нүүдлийн эндопатит нематодуудад хамаардаг1. Нарс модны нематодоос үүдэлтэй нарс хатах өвчин (PWD) нь Ази, Европ зэрэг хэд хэдэн тивд ноцтой асуудал болж байгаа бөгөөд Хойд Америкт нематод нь нутагшуулсан нарсны төрөл зүйлийг устгадаг1,2. Нарс модны тоо цөөрөх нь эдийн засгийн томоохон асуудал бөгөөд дэлхий даяар тархах магадлал нь санаа зовоож байна3. Дараах нарс модны төрөл зүйлд нематод хамгийн их халддаг: Pinus densiflora, Pinus sylvestris, Pinus thunbergii, Pinus koraiensis, Pinus thunbergii, Pinus thunbergii, Pinus radiata4. Нарсны нематод нь халдвар авснаас хойш хэдэн долоо хоног эсвэл хэдэн сарын дотор нарс модыг үхэлд хүргэдэг ноцтой өвчин юм. Үүнээс гадна, нарс модны нематодын дэгдэлт нь янз бүрийн экосистемд түгээмэл тохиолддог тул халдварын байнгын гинжин хэлхээг тогтоосон1.
Bursaphelenchus xylophilus нь Aphelenchoidea супер овогт хамаарах хорио цээрийн ургамал-паразит нематод бөгөөд 102.5-р бүлэгт багтдаг. Нематод нь мөөгнөөр хооллож, нарс модны эдэд үржиж, L1, L2, L3, L4 болон насанд хүрсэн бие даасан дөрвөн өөр авгалдай үе шатанд хөгждөг. 1,6. Хоол тэжээлийн хомсдолын нөхцөлд нарс нематод нь тусгай авгалдай үе шат болох dauer руу шилждэг бөгөөд энэ нь өөрийн тээвэрлэгч болох нарс холтосны цох (Monochamus alternatus)-ыг шимэгчлэн эрүүл нарс мод руу шилждэг. Эрүүл эзэн биед нематодууд ургамлын эд эсээр хурдан шилжиж, паренхимийн эсээр хооллодог бөгөөд энэ нь халдвар авснаас хойш нэг жилийн дотор хэд хэдэн хэт мэдрэгшлийн урвал, нарс хатаж, үхэлд хүргэдэг. 1,7,8.
Нарсны нематодын биологийн хяналт нь 20-р зуунаас эхтэй хорио цээрийн арга хэмжээнүүдтэй удаан хугацааны турш бэрхшээлтэй байсаар ирсэн. Нарсны нематодыг хянах одоогийн стратегиуд нь голчлон модыг утах, модны ишэнд нематод суулгах зэрэг химийн боловсруулалттай холбоотой юм. Хамгийн түгээмэл хэрэглэгддэг нематодууд нь авермектин гэр бүлд багтдаг авермектин ба авермектин бензоат юм. Эдгээр үнэтэй химийн бодисууд нь олон төрлийн нематодын эсрэг маш үр дүнтэй бөгөөд байгаль орчинд аюулгүй гэж тооцогддог9. Гэсэн хэдий ч эдгээр нематодыг давтан хэрэглэх нь тэсвэртэй нарсны нематод үүсэхэд хүргэх сонголтын дарамтыг бий болгоно гэж үзэж байгаа бөгөөд энэ нь Leptinotarsa decemlineata, Plutella xylostella болон Trichostrongylus colubriformis, Ostertagia circumcincta зэрэг хэд хэдэн шавьжны хортон шавьжид аажмаар авермектинд тэсвэртэй болсон болохыг харуулсан10,11,12. Тиймээс PVD-ийг хянах өөр, зардал багатай, байгаль орчинд ээлтэй арга хэмжээг олохын тулд эсэргүүцлийн хэв маягийг тогтмол судалж, нематоцидийг тасралтгүй шинжлэх шаардлагатай. Сүүлийн хэдэн арван жилд хэд хэдэн зохиогчид ургамлын ханд, эфирийн тос, дэгдэмхий бодисыг нематодын хяналтын бодис болгон ашиглахыг санал болгосон13,14,15,16.
Бид саяхан Caenorhabditis elegans 17-д эс хоорондын болон хаант улс хоорондын дохиоллын молекул болох индолын нематоцид үзүүлэх нөлөөг харуулсан. Индол нь бичил биетний экологид өргөн тархсан эсийн доторх дохио бөгөөд бичил биетний физиологи, спор үүсэх, плазмидын тогтвортой байдал, эмийн эсэргүүцэл, биофильм үүсэх, хоруу чанарт нөлөөлдөг олон тооны функцийг хянадаг 18, 19. Индол болон түүний уламжлалын бусад эмгэг төрүүлэгч нематодын эсрэг үйл ажиллагааг судлаагүй байна. Энэхүү судалгаанд бид 34 индолын нарсны нематодын нематоцид үзүүлэх нөлөөг судалж, хамгийн хүчтэй 5-иодоиндолын үйлчлэх механизмыг микроскоп, цагийн урсгалын гэрэл зураг, молекулын холболтын туршилт ашиглан тодруулж, үрийн соёололтын шинжилгээг ашиглан ургамалд үзүүлэх хортой нөлөөг үнэлсэн.
Индолын өндөр концентраци (>1.0 мМ) нь нематодуудад нематоцид нөлөө үзүүлдэг гэж өмнө нь мэдээлсэн байсан17. B. xylophilus (холимог амьдралын үе шатууд)-ийг индол эсвэл 33 өөр индолын деривативаар 1 мМ-д эмчилсний дараа B. xylophilus-ийн нас баралтыг хяналтын болон эмчилсэн бүлгүүдэд амьд болон үхсэн нематодуудыг тоолж хэмжсэн. Таван индол нь нематоцид үзүүлэх нөлөөг мэдэгдэхүйц харуулсан; эмчилээгүй хяналтын бүлгийн амьдрах чадвар 24 цагийн дараа 95 ± 7% байв. Туршилтад хамрагдсан 34 индолоос 1 мМ-д 5-иодоиндол ба 4-фториндол нь 100% нас баралт үүсгэсэн бол 5,6-дифториндиго, метилиндол-7-карбоксилат, 7-иодоиндол нь ойролцоогоор 50% нас баралт үүсгэсэн (Хүснэгт 1).
5-иодоиндол нь нарс модны нематодын вакуол үүсэх болон бодисын солилцоонд үзүүлэх нөлөө. (A) Авермектин ба 5-иодоиндол нь насанд хүрсэн эрэгчин нематод үзүүлэх нөлөө, (B) L1 үе шатны нематодын өндөг болон (C) B. xylophilus-ийн бодисын солилцоо, (i) 0 цагийн үед вакуол ажиглагдаагүй, эмчилгээ нь (ii) вакуол, (iii) олон вакуол хуримтлагдах, (iv) вакуол хавагнах, (v) вакуолууд нэгдэх, (vi) аварга том вакуол үүсэхэд хүргэсэн. Улаан сум нь вакуолын хавагнах, цэнхэр сум нь вакуолын нэгдэх, хар сум нь аварга том вакуолыг илтгэнэ. Хуваарийн мөр = 50 μм.
Үүнээс гадна энэхүү судалгаагаар нарсны нематод метаны улмаас үүссэн үхлийн дараалсан үйл явцыг мөн тайлбарласан (Зураг 4C). Метаногенийн үхэл нь цитоплазмын вакуол хуримтлагдахтай холбоотой апоптозгүй эсийн үхлийн төрөл юм27. Нарсны нематод ажиглагдсан морфологийн согог нь метаны улмаас үүссэн үхлийн механизмтай нягт холбоотой юм шиг байна. Өөр өөр цаг үед хийсэн микроскопийн шинжилгээгээр 5-иодоиндол (0.1 мМ)-д 20 цагийн дараа аварга том вакуол үүссэн болохыг харуулсан. Микроскопийн вакуолууд 8 цагийн эмчилгээний дараа ажиглагдсан бөгөөд тэдгээрийн тоо 12 цагийн дараа нэмэгдсэн. 14 цагийн дараа хэд хэдэн том вакуол ажиглагдсан. 12-16 цагийн эмчилгээний дараа хэд хэдэн нийлсэн вакуолууд тодорхой харагдаж байсан нь вакуолын нэгдэл нь метаногенийн үхлийн механизмын үндэс суурь болохыг харуулж байна. 20 цагийн дараа өтний туршид хэд хэдэн аварга том вакуол олдсон. Эдгээр ажиглалтууд нь C. elegans-д метуозын анхны тайланг илэрхийлж байна.
5-иодоиндолоор боловсруулсан өтнүүдэд вакуолын агрегаци ба хагарал ажиглагдсан (Зураг 5) бөгөөд энэ нь өтний нугалалт болон вакуолын хүрээлэн буй орчинд ялгаралтаар нотлогдсон. Мөн өндөгний хальсны мембранд вакуолын тасалдал ажиглагдсан бөгөөд энэ нь ихэвчлэн ангаахай үүсэх үед L2-ээр бүрэн бүтэн хадгалагддаг (Нэмэлт зураг S2). Эдгээр ажиглалтууд нь шингэн хуримтлагдах, осморегуляцийн дутагдал, мөн эргэлт буцалтгүй эсийн гэмтэл (RCI) нь вакуол үүсэх, идээших үйл явцад оролцдог болохыг баталж байна (Зураг 5).
Ажиглагдсан вакуол үүсэхэд иодын үүргийг таамаглаж, бид натрийн иодид (NaI) болон калийн иодид (KI)-ийн нематод устгах идэвхийг судалсан. Гэсэн хэдий ч концентрацид (0.1, 0.5 эсвэл 1 мМ) эдгээр нь нематодын амьд үлдэх эсвэл вакуол үүсэхэд нөлөөлөөгүй (Нэмэлт зураг S5), гэхдээ 1 мМ KI нь бага зэрэг нематод устгах нөлөөтэй байсан. Нөгөөтэйгүүр, 7-иодоиндол (1 эсвэл 2 мМ) нь 5-иодоиндолтой адил олон вакуол болон бүтцийн деформацийг өдөөсөн (Нэмэлт зураг S6). Хоёр иодоиндол нь нарсны нематод ижил төстэй фенотипийн шинж чанарыг харуулсан бол NaI болон KI нь үзүүлээгүй. Сонирхолтой нь, туршилтын концентрацид индол нь B. xylophilus-д вакуол үүсэхийг өдөөгөөгүй (өгөгдлийг харуулаагүй). Тиймээс үр дүнгээс харахад индол-иодын цогцолбор нь B. xylophilus-ийн вакуолжилт болон бодисын солилцоог хариуцдаг болохыг баталсан.
Нематоцидын идэвхжилийг туршсан индолуудын дунд 5-иодоиндол нь хамгийн өндөр гулсах индекстэй байсан бөгөөд дараа нь 7-иодоиндол (-4.48 ккал/моль), 4-фториндол (-4.33), индол (-4.03) орсон (Зураг 6). 5-иодоиндолын лейцин 218-тай хүчтэй нурууны устөрөгчийн холбоо нь түүний холболтыг тогтворжуулдаг бол бусад бүх индолын деривативууд нь хажуугийн гинжин устөрөгчийн холбоогоор дамжуулан серин 260-тай холбогддог. Бусад загварчилсан иодоиндолуудын дунд 2-иодоиндол нь -5.248 ккал/моль холболтын утгатай бөгөөд энэ нь лейцин 218-тай гол устөрөгчийн холбоотой холбоотой юм. Бусад мэдэгдэж буй холболтуудад 3-иодоиндол (-4.3 ккал/моль), 4-иодоиндол (-4.0 ккал/моль), 6-фториндол (-2.6 ккал/моль) орно (Нэмэлт зураг S8). 5-иодоиндол ба 2-иодоиндолоос бусад ихэнх галогенжүүлсэн индол болон индол өөрөө серин 260-тай холбоо үүсгэдэг. Лейцин 218-тай устөрөгчийн холбоо нь рецептор-лиганд үр дүнтэй холбогддог болохыг харуулж байгаа нь ивермектинд ажиглагдсан шиг (Нэмэлт зураг S7), 5-иодоиндол ба 2-иодоиндол нь ивермектинтэй адил лейцин 218-аар дамжуулан GluCL рецепторын идэвхтэй хэсэгт нягт холбогддог болохыг баталж байна (Зураг 6 ба Нэмэлт зураг S8). Энэхүү холболт нь GluCL цогцолборын нээлттэй нүх сүвний бүтцийг хадгалахад шаардлагатай бөгөөд GluCL рецепторын идэвхтэй хэсэгт нягт холбогдсноор 5-иодоиндол, 2-иодоиндол, авермектин ба ивермектин нь ионы сувгийг нээлттэй байлгаж, шингэнийг шингээх боломжийг олгодог гэж бид үзэж байна.
Индол ба галогенжүүлсэн индолын молекулын холболт GluCL-тэй. (A) индол, (B) 4-фториндол, (C) 7-иодоиндол, болон (D) 5-иодоиндол лигандуудын GluCL-ийн идэвхтэй төвтэй холбогдох чиглэл. Уураг нь туузаар дүрслэгдсэн бөгөөд нурууны устөрөгчийн холбоог шар цэгтэй шугамаар харуулав. (A′), (B′), (C′), болон (D′) нь харгалзах лигандуудын хүрээлэн буй амин хүчлийн үлдэгдэлтэй харилцан үйлчлэлийг харуулсан бөгөөд хажуугийн гинжин устөрөгчийн холбоог ягаан цэгтэй сумаар тэмдэглэв.
Байцаа, улаан луувангийн үрийн соёололтод 5-иодоиндолын хортой нөлөөг үнэлэх туршилтуудыг хийсэн. 5-иодоиндол (0.05 эсвэл 0.1 мМ) эсвэл авермектин (10 мкг/мл) нь анхны соёололт болон ургамлын ургалтад бага эсвэл огт нөлөө үзүүлээгүй (Зураг 7). Үүнээс гадна, боловсруулаагүй хяналтын үр болон 5-иодоиндол эсвэл авермектинээр боловсруулсан үрийн соёололтын хурдны хооронд мэдэгдэхүйц ялгаа ажиглагдаагүй. Үндэсний суналт болон үүссэн хажуугийн үндэсний тоонд үзүүлэх нөлөө нь ач холбогдолгүй байсан ч 1 мМ (идэвхтэй концентрациас 10 дахин их) 5-иодоиндол нь хажуугийн үндэсний хөгжлийг бага зэрэг хойшлуулсан. Эдгээр үр дүнгээс харахад 5-иодоиндол нь ургамлын эсэд хоргүй бөгөөд судлагдсан концентрацид ургамлын хөгжлийн үйл явцад саад учруулдаггүй.
5-иодоиндолын үрийн соёололтод үзүүлэх нөлөө. Мурашиге болон Скүүг агарын орчинд авермектин эсвэл 5-иодоиндолтой эсвэл авермектингүй B. oleracea болон R. raphanistrum үрийн соёололт, нахиалалт болон хажуугийн үндэслэлт. 22°C-д 3 хоногийн турш инкубацийн дараа соёололтыг тэмдэглэсэн.
Энэхүү судалгаагаар индолоор нематодыг устгасан хэд хэдэн тохиолдлыг мэдээлэв. Чухал зүйл бол энэ нь нарсны зүүнд иодоиндол метилжилтийг өдөөдөг (жижиг вакуолууд хуримтлагдаж, аажмаар аварга том вакуол болж нийлж, эцэст нь мембраны урагдал, үхэлд хүргэдэг процесс) анхны тайлан бөгөөд иодоиндол нь арилжааны нематоцид болох авермектинтэй төстэй мэдэгдэхүйц нематоцид шинж чанартай байдаг.
Индолууд нь прокариот ба эукариотуудад биофильм дарангуйлах/үүсэх, бактерийн амьдрах чадвар, эмгэг төрүүлэх чадвар зэрэг олон дохиоллын функцийг гүйцэтгэдэг болохыг өмнө нь мэдээлсэн байсан19,32,33,34. Саяхан галогенжүүлсэн индол, индолын алкалоид, хагас синтетик индолын деривативын эмчилгээний үр нөлөө нь судалгааны өргөн хүрээний сонирхлыг татсан35,36,37. Жишээлбэл, галогенжүүлсэн индолууд нь Escherichia coli болон Staphylococcus aureus-ийн байнгын эсүүдийг устгадаг болох нь батлагдсан37. Үүнээс гадна, галогенжүүлсэн индолын бусад зүйл, төрөл зүйл, хаант улсын эсрэг үр нөлөөг судлах нь шинжлэх ухааны сонирхол татахуйц бөгөөд энэхүү судалгаа нь энэхүү зорилгод хүрэх алхам юм.
Энд бид C. elegans-д 5-иодоиндолоор өдөөгдсөн үхлийн механизмыг эргэлт буцалтгүй эсийн гэмтэл (RCI) болон метилжилт дээр үндэслэн санал болгож байна (Зураг 4C ба 5). Хаван үүсэх, вакуолын доройтол зэрэг хавангийн өөрчлөлтүүд нь RCI болон метилжилтийн үзүүлэлт бөгөөд цитоплазмд аварга том вакуол хэлбэрээр илэрдэг48,49. RCI нь ATP үйлдвэрлэлийг бууруулж, ATPase шахуургыг эвдэж, эсийн мембраныг тасалдуулж, Na+, Ca2+ болон усны хурдацтай урсгалыг бий болгосноор энергийн үйлдвэрлэлд саад болдог50,51,52. Ca2+ болон усны урсгалын улмаас цитоплазмд шингэн хуримтлагдсаны үр дүнд амьтны эсэд цитоплазмын доторх вакуолууд үүсдэг53. Сонирхолтой нь, эсийн гэмтлийн энэ механизм нь түр зуурын шинжтэй бөгөөд эсүүд тодорхой хугацаанд ATP үүсгэж эхэлбэл буцаах боломжтой боловч хэрэв гэмтэл үргэлжилсээр эсвэл улам дордвол эсүүд үхдэг.54 Бидний ажиглалтаас харахад 5-иодоиндолоор эмчилсэн нематодууд стрессийн нөхцөлд өртсөний дараа хэвийн биосинтезийг сэргээж чадахгүй байна.
B. xylophilus-д 5-иодоиндолоор өдөөгдсөн метилжилтийн фенотип нь иодын агууламж болон түүний молекулын тархалттай холбоотой байж болох юм, учир нь 7-иодоиндол нь 5-иодоиндолоос B. xylophilus-д дарангуйлах нөлөө багатай байсан (Хүснэгт 1 ба Нэмэлт Зураг S6). Эдгээр үр дүн нь Maltese et al. (2014)-ийн судалгаатай хэсэгчлэн нийцэж байгаа бөгөөд тэд индол дахь пиридил азотын хэсгийг пара- байрлалаас мета- байрлал руу шилжүүлэх нь U251 эсүүдэд вакуолжилт, өсөлтийн дарангуйлал, цитотоксик чанарыг арилгаж, молекулын уургийн тодорхой идэвхтэй хэсэгтэй харилцан үйлчлэл нь чухал болохыг харуулж байна гэж мэдээлсэн бөгөөд энэ нь молекулын уургийн тодорхой идэвхтэй хэсэгтэй харилцан үйлчлэл нь чухал болохыг харуулж байна27,44,45. Энэхүү судалгаанд ажиглагдсан индол эсвэл галогенжүүлсэн индол ба GluCL рецепторуудын хоорондын харилцан үйлчлэл нь энэ ойлголтыг дэмжиж байгаа бөгөөд учир нь 5- ба 2-иодоиндол нь судлагдсан бусад индолуудаас илүү GluCL рецепторуудтай илүү хүчтэй холбогддог болохыг тогтоожээ (Зураг 6 ба Нэмэлт Зураг S8). Индолын хоёр дахь эсвэл тав дахь байрлал дахь иод нь GluCL рецепторын лейцин 218-тай нурууны устөрөгчийн холбоогоор холбогддог бол бусад галогенжүүлсэн индол болон индол нь серин 260-тай сул хажуугийн гинжин устөрөгчийн холбоо үүсгэдэг болохыг тогтоосон (Зураг 6). Тиймээс галогенийн байршил нь вакуолын доройтлыг өдөөхөд чухал үүрэг гүйцэтгэдэг бол 5-иодоиндолын нягт холболт нь ионы сувгийг нээлттэй байлгаж, улмаар шингэний хурдан урсгал болон вакуолын урагдал үүсэх боломжийг олгодог гэж бид таамаглаж байна. Гэсэн хэдий ч 5-иодоиндолын үйлчлэх нарийвчилсан механизмыг тодорхойлох шаардлагатай хэвээр байна.
5-иодоиндолыг практикт хэрэглэхийн өмнө ургамалд үзүүлэх хортой нөлөөг нь шинжлэх хэрэгтэй. Бидний үрийн соёололтын туршилтаар 5-иодоиндол нь судлагдсан концентрацид үрийн соёололт болон дараагийн хөгжлийн процесст сөрөг нөлөө үзүүлээгүй болохыг харуулсан (Зураг 7). Тиймээс энэхүү судалгаа нь нарс модны нематодын хор хөнөөлийг хянахын тулд экологийн орчинд 5-иодоиндолыг ашиглах үндэслэлийг бий болгож байна.
Өмнөх тайланд индолд суурилсан эмчилгээ нь антибиотикт тэсвэртэй байдал болон хорт хавдрын явцыг шийдвэрлэх боломжит арга барилыг илэрхийлж байгааг харуулсан55. Үүнээс гадна, индол нь бактерийн эсрэг, хорт хавдрын эсрэг, антиоксидант, үрэвслийн эсрэг, чихрийн шижингийн эсрэг, вирусын эсрэг, үржлийн эсрэг болон сүрьеэгийн эсрэг үйлчилгээтэй бөгөөд эмийг хөгжүүлэх ирээдүйтэй үндэс суурь болж чадна56,57. Энэхүү судалгаагаар анх удаа иодыг шимэгч хорхойн эсрэг болон гельминтийн эсрэг бодис болгон ашиглах боломжтойг харуулж байна.
Авермектиныг гурван арван жилийн өмнө нээж, 2015 онд Нобелийн шагнал хүртсэн бөгөөд үүнийг гельминтийн эсрэг эм болгон ашиглах нь одоо ч идэвхтэй үргэлжилж байна. Гэсэн хэдий ч нематод болон хортон шавьжны авермектинд тэсвэртэй байдал хурдацтай хөгжиж байгаатай холбогдуулан нарс модны PWN халдварыг хянах өөр хувилбар, хямд өртөгтэй, байгаль орчинд ээлтэй стратеги шаардлагатай байна. Энэхүү судалгаагаар 5-иодоиндол нь нарсны нематодыг хэрхэн устгадаг, 5-иодоиндол нь ургамлын эсэд бага хоруу чанартай байдаг нь ирээдүйд арилжааны хэрэглээнд сайн ирээдүйг нээж өгдөг болохыг мэдээлэв.
Бүх туршилтыг Солонгосын Кёнсан хотын Ёнгнам Их Сургуулийн Ёс зүйн хороо баталсан бөгөөд аргуудыг Ёнгнам Их Сургуулийн Ёс зүйн хорооны удирдамжийн дагуу гүйцэтгэсэн.
Өндөгний инкубацийн туршилтыг тогтсон журмын дагуу хийсэн43. Ангаахайн хурдыг (HR) үнэлэхийн тулд 1 хоногтой насанд хүрсэн нематодуудыг (ойролцоогоор 100 эмэгчин, 100 эрэгчин) мөөгөнцөр агуулсан Петрийн аяганд шилжүүлж, 24 цагийн турш ургуулсан. Дараа нь өндгийг ялгаж, 5-иодоиндол (0.05 мМ ба 0.1 мМ) эсвэл авермектин (10 мкг/мл)-аар ариутгасан нэрмэл усанд суспенз болгон боловсруулсан. Эдгээр суспензийг (500 мкл; ойролцоогоор 100 өндөг) 24 нүхтэй эдийн өсгөврийн хавтангийн нүхэнд шилжүүлж, 22 °C-д инкубацалсан. L2 тооллогыг 24 цагийн инкубацийн дараа хийсэн боловч нарийн цагаан алт утсаар өдөөхөд эсүүд хөдлөхгүй бол үхсэн гэж үзсэн. Энэхүү туршилтыг хоёр үе шаттайгаар, тус бүр зургаан давталттайгаар явуулсан. Хоёр туршилтын өгөгдлийг нэгтгэж, танилцуулсан. HR-ийн хувийг дараах байдлаар тооцоолсон:
Авгалдайн нас баралтыг өмнө нь боловсруулсан аргуудыг ашиглан үнэлсэн. Нематодын өндгийг цуглуулж, үр хөврөлийг ариутгасан нэрмэл усанд ангаахай гаргаж синхрончилсон бөгөөд ингэснээр L2 үе шатны авгалдай үүснэ. Синхрончлогдсон авгалдай (ойролцоогоор 500 нематод)-ыг 5-иодоиндол (0.05 мМ ба 0.1 мМ) эсвэл авермектин (10 мкг/мл)-аар боловсруулж, B. cinerea Petri ялтсан дээр өсгөвөрлөв. 22°C-д 48 цагийн турш инкубацийн дараа нематодыг ариутгасан нэрмэл усанд цуглуулж, L2, L3, L4 үе шатууд байгаа эсэхийг шалгасан. L3 ба L4 үе шатууд байгаа нь авгалдайн хувирал байгааг харуулсан бол L2 үе шат байгаа нь хувирал байхгүй байгааг харуулсан. Зургийг iRiS™ Дижитал эсийн дүрслэлийн системийг ашиглан авсан. Энэхүү туршилтыг хоёр үе шаттайгаар, тус бүр зургаан давталттайгаар явуулсан. Хоёр туршилтын өгөгдлийг нэгтгэж, танилцуулсан.
5-иодоиндол ба авермектины үрэнд үзүүлэх хоруу чанарыг Мурашиге болон Скоог агарын хавтан дээрх соёололтын туршилтаар үнэлсэн.62 B. oleracea болон R. raphanistrum үрийг эхлээд нэг өдрийн турш ариутгасан нэрмэл усанд дэвтээж, 1 мл 100% этанолоор угааж, 1 мл 50% худалдааны цайруулагч (3% натрийн гипохлорит)-аар 15 минутын турш ариутгаж, 1 мл ариутгасан усаар таван удаа угаасан. Дараа нь ариутгасан үрийг 0.86 г/л (0.2X) Мурашиге болон Скоог орчин болон 0.7% бактериологийн агар агуулсан соёололтын агарын хавтан дээр дарж, 5-иодоиндол эсвэл авермектинтэй эсвэл авермектингүй болгосон. Дараа нь хавтангуудыг 22°C-д инкубацилж, 3 хоногийн инкубацийн дараа зургийг авсан. Энэхүү туршилтыг хоёр үе шаттайгаар явуулсан бөгөөд тус бүр нь зургаан удаа давтагдсан.
Нийтэлсэн цаг: 2025 оны 2-р сарын 26